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蛋白酶K可以消化各種蛋白質(zhì)

更新時(shí)間:2018-04-25      瀏覽次數(shù):3561
        蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,可消化各種蛋白質(zhì)。可以在DNA、RNA抽提中內(nèi)源性核酸酶的去除,ChIP實(shí)驗(yàn)蛋白-核酸復(fù)合物解交聯(lián)后蛋白質(zhì)的降解,原位雜交前組織樣本的制備??捎糜谔堑鞍仔揎椇偷鞍捉Y(jié)構(gòu)分析等實(shí)驗(yàn)中。蛋白酶保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
  酶活性:>30 U/mg(每分鐘血紅蛋白釋放1 μmol Folin-陽(yáng)性酪氨酸所需量,pH7.5,37℃);
  酶純度:>99.5%(經(jīng)Native-PAGE及l(fā)aser scan分析);
  污染物分析:經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),無(wú)DNA及RNA污染;
  稀釋緩沖液:ddH2O
  分子量:29.730 KD
  pH范圍:在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4~12.5)均有活性,*pH范圍為pH 7.5~8.0。
  蛋白酶K的反應(yīng)溫度:37~65℃,推薦反應(yīng)溫度選擇50~55℃。溫度超過(guò)65℃或TCA、AEBSF、PMSF或DFP存在情況下會(huì)抑制蛋白酶 K的活性。
  工作濃度:常用工作濃度為0.05~1 mg/ml,根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。
 蛋白酶K的儲(chǔ)存條件:保存于-20℃,保存妥當(dāng)時(shí),酶效力可保存3年。
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